维生素D的前世今生及临床LC-MS/MS检测金标准

导语

近年来，应用液相色谱-串联质谱法进行临床检测的项目当中，维生素D的检测可算得上是最火热的项目了。据调查显示，国内维生素D的临床检测逐年递增。国内的一些第三方检测中心，其每年应用液质联用仪检测的数量早已突破30万例！还有一些三甲医院也陆陆续续开展了维生素D的质谱检测，下面为大家介绍下神奇的维生素D。

维生素D的发现之旅

维生素D(vitamin D )为固醇类衍生物，目前被认为也是一种类固醇激素，维生素D家族成员中最重要的成员是VD2（麦角钙化醇）和VD3（胆钙化醇）。维生素D的发现是人们与佝偻症抗争的结果。

其实除了佝偻病，维生素D缺乏甚至与癌症、糖尿病、软骨病、免疫系统疾病、精神分裂症等息息相关。据报道，全球居然有近10 亿人维生素D不足或缺乏！

那如何判断维生素D在人体内缺乏与过量呢？

维生素D在人体内的最优浓度水平尚有争议，但是大部分科学家认为浓度水平低于20μg/L（50nmol/L）定义为维生素缺乏。浓度水平在21~29μg/L（52~72nmol/L）水平可以被认为指示维生素D相对缺乏，大于150μg/L（374nmol/L）则可观察到维生素D中毒。也就是说维生素D的水平在30~150μg/L则为正常水平。

维生素D对人体既然如此重要，那它在人体中是如何吸收和作用的呢？下面我们可以从维生素D代谢途径进行了解。

维生素D体内生理过程

图1 维生素D体内代谢过程

维生素D获取途径

由此可见，要想使人体中的维生素D维持在正常水平，就需要通过食物摄入和适量的阳光浴。

常见富含维生素D的食物推荐：海鱼和鱼卵、动物肝脏、蛋黄、奶油和奶酪等。

普及了那么多有关维生素D的知识，那临床检测维生素D都有什么方法呢？

维生素D的检测

1.放射免疫法（radioimmunoassav, RIA）

优点：初始投入成本低、高自动化、重现性好； 

缺点：特异性不高，不能准确测定25羟基维生素D2的含量；测试样本成本较高；回收率较差；

2.酶联免疫法（Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, ELISA）或化学发光免疫法（chemiluminescence immunoassay, CLIA）

优点：检测速度快、费用低廉、仪器简单易携、灵敏度高和选择性强等；

缺点：特异性和灵敏度不高、操作繁琐费时；

3.高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）

优点：分离效果好、速度快等； 

缺点：基质效应严重、不能很好的定性等；

4.液相色谱串联质谱法（Liquid chromatography –tandem mass spectrometry method, LC-MS/MS）

优点：国际上维生素D检测的金标准！具有灵敏度高、专属性强、能同时监测25-羟维生素D2和25-羟维生素D3；

缺点：初始投入成本高、对操作人员技术要求高；

同时检测25（OH）D2和25（OH）D3的意义何在？

25（OH）D是机体维生素D的主要储存形式，占总量的95%以上。由于其半衰期长（2~3周），并且不受血钙和甲状旁腺素水平的影响，因此被公认为是客观评价维生素D营养状况的最佳指标。

2010年，来自临床和实验室的专家们共同推荐25（OH）D的检测方法应能同时检测出25（OH）D2和25（OH）D3，以保证来源于植物或动物的维生素D补充均能够被检测出。因此，临床实验室需要选择一种可以同时识别2种25（OH）D形式的检测方法。